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    貓瘟病毒(FPV)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

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    【產品名稱】

    通用名稱:貓瘟病毒(FPV)核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)

    Name:Feline Panleukopenia Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

    【包裝規格】10T/盒         

                                                        

    【預期用途】

    貓泛白細胞減少癥,也稱貓瘟熱,是由貓泛白細胞減少癥病毒(Feline Panleuk -openia Virus, FPV)引起的一種高度接觸性傳染病。該病在自然條件下可感染貓科、浣熊科和鼬科等動物,感染比較普遍。FPV傳播性強,感染動物可通過糞便、嘔吐物、鼻涕、唾液、尿液排出病毒從而污染食具、籠子、墊物和周圍環境,妊娠母貓也可垂直傳播給胎兒,跳蚤和吸血昆蟲可成為傳播媒介。FPV致病性強,妊娠母貓胎兒畸形胎甚至流產,死亡率高且無任何前驅癥狀[1]。

    本試劑盒適用于檢測泄殖腔棉拭子、糞便、全血,病死貓的腸道等樣本中的貓瘟病毒,用于貓瘟病毒感染的輔助診斷。

     

    【檢驗原理】

    本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術,設計一對貓瘟病毒基因組特異性引物,結合一條特異性探針,用熒光PCR技術對貓瘟病毒基因組的DNA進行體外擴增檢測,用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

     

    【試劑組成】

    包裝規格

    25T/盒

    50T/盒

    FPV反應液

         500μL×1管

         500μL×2管

    酶液

           25μL×1管

           50μL×1管

    FPV陽性質控品

          50μL ×1管

          50μL ×1管

    陰性質控品

         250μL ×1管

         250μL ×1管

     

    說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

     

    【儲存條件及有效期】-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融次數不超過5次,有效期12個月。

     

    適用儀器ABI 、安捷倫MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf等系列熒光定量PCR檢測儀。

     

    【標本采集】患病貓等動物:泄殖腔棉拭子、糞便、全血;病死貓:腸道內容物

     

    【保存和運輸】

    上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過6個月,標本運送應采用2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。

     

    使用方法

    1. 樣品處理(樣本處理區)

    1.1 樣本前處理

    組織樣品:每份組織分別從3個不同的位置稱取樣品約1g,手術剪剪碎混勻后取0.5g于研磨器中研磨,加入1.5mL生理鹽水后繼續研磨,待勻漿后轉至1.5mL滅菌離心管中,8000rpm離心2min,取上清液100μL于1.5mL滅菌離心管中;咽拭子樣品直接取100μL于1.5mL滅菌離心管中。

    1.2 核酸提取

    推薦采用廣州維伯鑫生物科技股份有限公司生產的核酸提取或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進行核酸提取,請按照試劑說明書進行操作。

    2. 試劑配制(試劑準備區)

    根據待檢測樣本總數,設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1管陰性對照+1管陽性對照;樣品每滿10份,多配制1份),每測試反應體系配制如下表:

    試劑

    FPV反應液

    酶液

    用量(樣本數為N)

    20μL

    1μL

     

    將混合好的測試反應液分裝到PCR反應管中,21uL/管。

    3. 加樣(樣本處理區)

    將步驟1提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取4μL,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

    4. PCR擴增(核酸擴增區)

    4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內;

    4.2 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為25μL;

    熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI系列儀器請勿選擇ROX參比熒光,選擇None即可。

    4.3 推薦循環參數設置:

    步驟

    循環數

    溫度

    時間

    收集熒光信號

    1

    1 cycle

    95℃

    10min

    2

    40 cycles

    94℃

    15sec

    55℃

    30sec


     

    注意事項

    1.所有操作嚴格按照說明書進行;

    2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化,完全混勻并短暫離心;

    3.反應液應避光保存;

    4.反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

    5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服;

    6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行,以免交叉污染;

    7.實驗完畢后用10%次氯酸或75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

    8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。

     

    參考文獻

    [1] 亢文華, 趙鳳龍, 郝霖雨. 貓泛白細胞減少癥的研究進展, 中國畜牧獸醫, 2008.

    [2] 邱杰, 溫肖會, 翟少倫, 等. 貓泛白細胞減少癥病毒VP2基因快速檢測方法的建立與應用[J]. 中國動物傳染病學報, 2015.

     

    【生產企業】

    企業名稱:廣州維伯鑫生物科技股份有限公司 郵 編:510663

    生產地址:廣州高新技術產業開發區科學城科豐路31號G11棟201號

    電子郵箱:info@vipotion.com 電 話:020-66377266

    公司網址:http://www.mouragioskiathos.com 傳 真:020-66377267


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